每日一题_2022.5.2

A 37-year-old man is admitted to the hospital for alcoholic-induced pancreatitis and has been in the ICU for 52 days. He has undergone pancreatic necrosectomy and multiple subsequent debridement surgeries. He has had several transcutaneous drains placed by interventional radiology into multiple intra-abdominal abscesses. He is febrile with leukocytosis. His most recent culture results show that he has polymicrobial growth, including gram-negative bacilli, anaerobic; gram-negative bacilli, aerobic, lactose fermenter, oxidase-negative, indole-positive; gram-positive cocci in chains, aerobic, no hemolysis. The attending physician selects the appropriate broad-spectrum antimicrobial therapy while awaiting formal speciation and sensitivities.

The patient’s bacteria growth profile will most likely show which of the following organisms

A. Fusobacterium species, Klebsiella pneumonia, Streptococcus pyogenes 

B. Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis, Bacillus cereus

C. Bacteroides fragilis, Enterobacter cloacae, Enterococcus faecium

D. Serratia species, Proteus mirabilis, Haemophilus species

E. Gardnerella species, Clostridium difficile, Enterococcus species

答案解析：

了解革兰氏染色结果有助于及时指导和定制适当的抗菌治疗。可根据革兰氏染色结果使用微生物流程图，以帮助描绘准确的潜在微生物。随后的机构特异性抗菌谱可以指导抗菌药物滴定。根据革兰氏染色数据，选择唯一适当的微生物组合。肺炎克雷伯菌为氧化酶阴性和吲哚阴性，表皮葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈簇状。沙雷氏菌属、奇异变形杆菌、嗜血杆菌属均为革兰氏阴性菌。加德纳菌属、艰难梭菌、肠球菌属均为革兰氏阳性菌。

正确答案：C

补充内容：

多种分子技术（例如PCR、定量PCR、基因组测序和质谱）可以区分细菌种类，甚至特定菌株。但是，即使没有深入的了解，细菌之间也存在表型差异，这些特点可以用来区分它们。这包括了形状（例如细菌与球菌），特定营养物的生长以及对高或低氧环境的偏爱等特征。根据所研究的特征，细菌分为几大类，但是这些信息加在一起可以极大地确定细菌可能的身份。这样一种有用的分类：基于细菌细胞壁的结构，细菌是革兰氏阳性还是革兰氏阴性。

革兰氏阳性细菌与革兰氏阴性细菌的结构差异

下图说明了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的结构差异。导致革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的可视化特性不同的两个关键特征是肽聚糖层的厚度以及是否存在外部脂质膜。这是因为壁结构会影响细胞保留革兰氏染色中使用的结晶紫染色的能力，然后可以在光学显微镜下对其进行观察。

革兰氏阳性菌具有厚的肽聚糖层，没有外部脂质膜，而革兰氏阴性菌具有较薄的肽聚糖层，并且具有外部脂质膜。由于革兰氏阳性菌缺少外部脂质膜，因此正确地指示其结构而不是染色特性时，它们被称为单体。革兰氏阴性菌拥有的外脂质膜意味着，当其物理结构时，它们被称为二异味。

革兰氏染色技术由丹麦细菌学家Hans Christian Gram在1884年开发。尽管革兰氏染色不会告诉您正在寻找的特定物种，但是它可以是一种快速缩小潜在候选范围并在必要时直接进行后续测试的快速方法。

革兰氏阳性染色与革兰氏阴性染色

革兰氏染色步骤

准备样品：

1.在干净的玻璃显微镜载玻片上贴上样品标识。确保使用铅笔，因为染色过程中使用的试剂可能会洗掉墨水。

2.如果是从液态细菌培养物中制备载玻片，请执行以下操作：使用无菌环将一滴小滴培养物轻拍到载玻片上。将小滴以圆周运动的方式轻轻涂抹到直径约1厘米的区域中。对于非常密集的培养物，可能需要预先稀释培养物，以确保染色后在显微镜下可以看到单个细菌细胞。如果源材料来自细菌板：将菌落材料环重悬在无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，然后进行液体培养。

3.涂抹物风干后，将涂抹过的载玻片通过火焰两次或三次。这会杀死 涂片中的微生物并将样品固定在载玻片上，但请注意不要使样品过热， 因为这会改变细胞形态。

样品染色：

1.轻轻地用紫罗兰色的紫色涂抹，然后静置1分钟。稍微倾斜片子，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗 。结晶紫是一种水溶性染料，可进入细菌细胞壁中的肽聚糖层。

2.用克氏碘轻轻涂抹涂片，然后静置1分钟。稍微倾斜幻灯片，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗。现在，涂片将显示为紫色。加入革兰氏碘溶液（碘和碘化钾）与紫罗兰形成复合物，紫罗兰色晶体变得更大，而且不溶于水。

3.使用95％乙醇或丙酮使涂片脱色。稍微倾斜滑片，然后逐滴滴加酒精，直到酒精几乎完全清除（5-10秒），立即用水冲洗以避免过度脱色。脱色剂使肽聚糖层脱水，使其收缩并变紧。在革兰氏阳性细菌中，大的结晶紫碘复合物无法穿透并逃脱厚的肽聚糖层，从而形成紫色染色的细胞。然而，在革兰氏阴性细菌中，外膜降解，肽聚糖薄层不能保留结晶的紫-碘配合物，并且颜色丢失。

4.用番红花复染剂轻轻冲洗，并放置45秒钟。稍微倾斜幻灯片，然后用自来水或蒸馏水轻轻冲洗。 番红花微溶于水，会使细菌细胞染成淡红色，从而使革兰氏阴性细胞可视化，而不会影响对革兰氏阳性细胞紫色的观察。

5.将载玻片吸干，放在滤纸上，然后在油浸下使用光学显微镜观察涂片。

革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌的区别

革兰氏阳性菌

当革兰氏染色后在光学显微镜下观察时，革兰氏阳性细菌具有独特的紫色外观。这是由于紫色结晶紫染色保留在细胞壁的厚肽聚糖层中。革兰氏阳性细菌的例子包括所有葡萄球菌，所有链球菌和某些李斯特菌。